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ATCC細(xì)胞庫(kù)介紹及其使用方法

 更新時(shí)間:2023-05-08 點(diǎn)擊量:1205

ATCC細(xì)胞庫(kù)介紹:

ATCC(美國(guó)模式菌種收集中心),又稱為美國(guó)菌種保藏中心, 是位于馬里蘭洲洛克菲勒的一家私營(yíng)的,非贏利性組織,可提供各種動(dòng)植物細(xì)胞、標(biāo)準(zhǔn)品、菌株達(dá)兩萬多種。ATCC的創(chuàng)立源于1925年某科學(xué)委員會(huì)意識(shí)到,科學(xué)研究對(duì)于微生物的需求增大,從而萌發(fā)了一個(gè)想法:創(chuàng)建一個(gè)微生物相關(guān)制品供應(yīng)中心。至今,ATCC向世界各地的政府、企業(yè)、科研機(jī)構(gòu)提供生物制品、技術(shù)支持和培訓(xùn),成為了一個(gè)以非盈利為目的的全球性質(zhì)的生物資源中心。ATCC擁有目前世界上zui大的、品種zui豐富的微生物、細(xì)胞系以及重組DNA原料,同時(shí)它也是科研工作者gogn ren的提供shijieji的可靠的研究材料的供應(yīng)商。

ATCC細(xì)胞的使用方法:

1、細(xì)胞收到后的操作方法:

  取25cm2培養(yǎng)瓶,75%酒精擦拭培養(yǎng)瓶,放入37℃,5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置4-6小時(shí)或隔夜,以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。然后,用75%酒精擦拭培養(yǎng)瓶,拆下封口膜,收集瓶?jī)?nèi)液體于50ml離心管中,1000rpm離心5min,棄上清,用6ml細(xì)胞培養(yǎng)基重懸,全部接種到25cm2培養(yǎng)瓶中,再放入37℃,5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。如果離心后細(xì)胞量很多,可以直接1:2分瓶培養(yǎng)。

2、細(xì)胞傳代:

細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)瓶的85%及以上面積時(shí),收集瓶?jī)?nèi)液體于15ml離心管中,1000rpm5min,棄上清,用12ml細(xì)胞培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,按1:2的比例進(jìn)行接種傳代,接種到25cm2培養(yǎng)瓶中,放入37℃,5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),2-3天更換培養(yǎng)液。  

3、細(xì)胞凍存:

a、細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)瓶的85%及以上面積時(shí),收集瓶?jī)?nèi)液體于15ml離心管中,1000rpm離心5min,棄上清,用適當(dāng)量的凍存液(基礎(chǔ)培養(yǎng)基:FBSDMSO=5:4:1)重懸細(xì)胞,并放置于凍存管中。

b、先將細(xì)胞凍存管放置于40.5h,再放置于-201.5h,然后將其移入-80℃隔夜,24h后可轉(zhuǎn)入液氮中進(jìn)行長(zhǎng)期保存。

4、細(xì)胞復(fù)蘇:

a、從液氮中取出細(xì)胞凍存管,快速將其置入37℃水浴中解凍,直至凍存管中無結(jié)晶,然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁。

b、將凍存管中的細(xì)胞移至含有5ml細(xì)胞培養(yǎng)液的15ml離心管中,然后1000rpm/min,離心5min。

c、棄上清,沉淀細(xì)胞用6ml細(xì)胞培養(yǎng)基重懸,接種到培養(yǎng)瓶中,最后放入37℃,5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

d、第二天,換用新鮮細(xì)胞培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。


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